PCR SPEKTRO DAN FLOW CYTOMETRY

Apa prinsip dasar dari PCR (Polymerase Chain Reaction)?

• Mengukur absorbansi cahaya oleh molekul
  

• Menggandakan fragmen DNA target secara in vitro
  

• Mengukur aktivitas enzim dalam sel
  

• Memisahkan sel berdasarkan ukuran dan kepadatan

Tahapan “annealing” dalam PCR berfungsi untuk:

• Denaturasi DNA ganda menjadi tunggal
  

• Sintesis DNA oleh DNA polymerase

• Penempelan primer pada DNA cetakan

• Visualisasi hasil amplifikasi DNA

Kelebihan utama PCR dibanding metode lain adalah:

• Dapat mendeteksi sel hidup dan mati sekaligus

• Cepat dan sangat sensitif terhadap DNA target

• Tidak memerlukan enzim khusus

• Menghasilkan data hanya berupa konsentrasi molekul

Prinsip dasar spektrofotometri adalah:

• Pengukuran absorbansi cahaya oleh sampel pada panjang gelombang tertentu

• Pemisahan sel berdasarkan muatan listrik

• Amplifikasi DNA menggunakan primer spesifik

• Analisis ekspresi gen dalam jaringan

Spektrofotometri sering digunakan untuk mengukur:

• Konsentrasi DNA atau protein dalam larutan

• Jumlah antibodi yang berikatan dengan antigen
  

• Jumlah sel per satuan volume darah

• Aktivitas PCR pada setiap siklus

Keterbatasan spektrofotometri adalah:

• Perlu thermal cycler khusus
  

• Tidak spesifik, hasil dapat dipengaruhi oleh kontaminan
  

• Tidak dapat digunakan pada protein
  

• Hanya dapat menganalisis sel hidup

Flow cytometry bekerja berdasarkan prinsip:

• Analisis absorbansi cahaya larutan DNA

• Pemisahan sel dalam aliran fluida dengan deteksi cahaya

• Penggandaan DNA dengan enzim polimerase

• Pewarnaan kromogenik pada jaringan

Salah satu kelebihan flow cytometry adalah:

• Relatif murah dan sederhana

• Dapat menganalisis banyak parameter sel secara simultan

• Tidak membutuhkan antibodi pewarna

• Dapat menggandakan DNA dengan cepat

Apa salah satu keterbatasan flow cytometry?

• Sensitivitas rendah terhadap protein

• Hanya bisa menganalisis satu sel dalam satu waktu

• Membutuhkan peralatan mahal dan analisis kompleks

• Tidak dapat digunakan untuk analisis sel imun

Kombinasi penggunaan PCR, spektrofotometri, dan flow cytometry dalam riset kedokteran gigi memungkinkan:

• Deteksi DNA bakteri, pengukuran protein, dan analisis sel imun

• Amplifikasi DNA tanpa analisis lebih lanjut

• Visualisasi jaringan gigi secara radiografis

• Menentukan warna gigi untuk restorasi estetik