Design de primers

O objetivo dos primers é...

• estabilizar o template de DNA quando aumenta a temperatura

• iniciar a síntese de DNA ligando-se ao fragmento alvo

• amplificar sequências de RNA

• degradar fragmentos de DNA não desejados

Que característica não afeta a especificidade dos primers?

• Tamanho

• % de GC

• Temperatura de melting

• Possibilidade de criar estruturas secundárias

Considerando

5'-GTACTAGGATTAATGCGTTT-3' como a sequência de primer, o fragmento de DNA alvo é...

• 5'-GTACTAGGATTAATGCGTTT-3'

• 3'-GTACTAGGATTAATGCGTTT-5'

• 3'-AAACGCATTAATCCTAGTAC-5'

• 5'-AAACGCATTAATCCTAGTAC-3'

A propósito do comprimento do primer na PCR, indica qual das afirmações está correta.

• • O comprimento do primer não tem impacto no processo de amplificação

• • Primers mais longos proporcionam sempre melhores resultados na PCR

• • O comprimento do primer é importante para a especificidade e eficiência de ligação na PCR

• 1. O comprimento do primer afeta a temperatura da reação da PCR

Considerando as sequências complementares no design de primers, indica qual das afirmações é a correta.

• • As sequências complementares aumentam a eficiência de ligação dos primers

• • Evitar sequências complementares previne a formação de estruturas secundárias que podem prejudicar a eficiência e especificidade da PCR.

• • As sequências complementares são essenciais para a replicação precisa do ADN

• 1. O uso de sequências complementares aumenta a quantidade de produtos da PCR.

Um primer é uma pequena sequência de _____ que se liga à sua sequência _____ no alvo.

• proteína; DNA

• DNA; exata

• RNA; exata

• DNA; complementar

O que é GC clamp em primer design?

• Uma região com % elevada de T/A na extremidade 5'

• Uma região com % elevada de C/G na extremidade 5'

• Uma região com % elevada de T/A na extremidade 3'

• Uma região com % elevada de G/C na extremidade 3'

Qual o propósito de validar primers?

• • Para garantir que têm o comprimento correto.

• • Para verificar a especificidade e eficiência.

• • Para os visualizar num gel.

• 1. Para determinar a temperatura de melting

Para PCR convencional, os primers devem ser constituídos por...

• 30-35 bp

• 18-25 bp

• 25-30 bp

• 10-15 bp

Para PCR convencional, a temperatura de melting dos primers deve ser...

• 50-55ºC

• 65-70ºC

• 57-63ºC

• 75-80ºC