BC I: 4. Techniques for protein analysis

เมื่อได้เห็นคะแนนเก็บของตนเอง นิสิตจะรู้สึก...

• ใจฟู

• เป็นผู้ประสบภัย

• ต้องการลายเซ็นต์ อ ที่ปรึกษา

• จะขยันให้มากขึ้น

เทคนิคใดต่างจากพวก

• Salting in

• Salting out

• Salt fractionation

• ปรับ pH ให้เท่ากับ pI

ข้อใดถูก เกี่ยวกับ Chromatography ทุกชนิด

• ต้องมี Stationary phase

• ต้องมี Mobile phase

• หากโปรตีนชอบจับ/อยู่กับ "Stationary phase" มากกว่า จะถูกแยกออกมา "ช้า"

• หากโปรตีนชอบจับกับ "Eluent" มากกว่า จะถูกแยกออกมา "เร็ว"

• ถูกทุกข้อ

ข้อใดผิด เกี่ยวกับ Gel filtration

• แยกโปรตีนตาม ขนาด

• โมเลกุลใหญ่ แยกออกมาก่อน

• โมเลกุลขนาดเล็ก เข้าไปอยู่ข้างในเม็ดเจล ซึ่งเป็น Eluent

• แยกโปรตีนได้เพียง 2 ขนาด คือ ใหญ่ หรือ เล็กกว่าขนาดรูของเม็ด gel

• คอลัมน์ยิ่งยาว ประสิทธิภาพการแยกโปรตีนดีขึ้น

ข้อใดผิด เกี่ยวกับ Affinity chromatography

• ตัวอย่างโปรตีนจับกับ ligand ที่อยู่ใน stationary phase

• โปรตีนถูกแยกออกมา เมื่อโปรตีนจับกับ ligand ที่อยู่ใน mobile phase

• โปรตีนถูกแยกออกมาโดยการเปลี่ยน pH ของ mobile phase

• ความยาวของคอลัมน์ ส่งผลต่อประสิทธิภาพการแยกโปรตีน

ข้อใดผิดเกี่ยวกับ Ion exchange (chromatography)

• Stationary phase ต้องมีประจุ

• การแยกโปรตีน ขึ้นอยู่กับ pH ของ Eluent ที่เปลี่ยนประจุของ Stationary phase

• Anion exchange โปรตีนมีประจุ - ส่วน Stationary phase มีประจุ +

• ช่วง pH ของ Eluent ควรอยู่ในช่วง 0.5-1.5 มากกว่าหรือน้อย pI ของโปรตีน

ข้อใดผิด สำหรับ Cation Exchange

• เมื่อต้องการให้โปรตีนจับคอลัมน์ ต้องปรับ pH<pI

• เมื่อต้องการ Elute โปรตีน ต้องปรับ pH>pI

• เมื่อต้องการ Elute โปรตีน ให้เติมเกลือ

• Stationary phase มีประจุลบ

• ไม่มีข้อผิด

ข้อใดผิดเกี่ยวกับ เทคนิค Gel electrophoresis

• เจลวางแนวตั้ง ขั้วลบอยู่ด้านบน

• โปรตีนทุกตัวเคลื่อนที่ไปในทิศทางเดียวกัน

• โปรตีนในเจลมีการเคลื่อนที่แตกต่างกัน เนื่องจาก ประจุและรูปร่าง ที่แตกต่างกัน

• โปรตีนตัวเล็กกว่า เคลื่อนที่เร็ว/ไกลกว่า หรืออยู่ใกล้ขั้วไฟฟ้า บวก ที่สุด

• การเติม SDS และให้ความร้อน เพื่อ denature โปรตีน

ข้อใดถูก เกี่ยวกับเทคนิค Edman Degradation

• ทำให้ทราบโครงสร้างระดับ Tertiary structure ของโปรตีน

• Residue ด้าน C-terminal เกิดการติด phenylisothiocyanate

• ทราบลำดับกรดได้ 30-40 residues

• ไม่ต้องมีการเปรียบเทียบโครงสร้างกับสารมาตรฐาน

ข้อใดถูก เมื่อต้องการทราบ primary structure ของเปปไทด์มากกว่า 40 residues

• ต้องมีการทำลาย Primary structure

• ต้องมีการใช้เทคนิค Edman degradation หรือ Mass spectrometry ร่วมด้วย

• ต้องมีการทำ overlapping peptides เพื่อลำดับ sequence จาก N ไป C-terminal ที่สมบูรณ์

• ถูกทุกข้อ