Kolorimetrische Proteinkonzentrationsbestimmung

Welcher Farbstoff wird beim Bradford-Assay hauptsächlich verwendet?

• Bromphenolblau

• Xylencyanol

• Coomassie-Brilliantblau G-250

• Kristallviolett

Was passiert in Gegenwart von Proteinen mit dem Absorptionsmaximum von Coomassie-Brilliantblau G-250?

• Es bleibt bei 465 nm

• Es verschiebt sich von 465 nm zu 595 nm

• Es verschiebt sich von 595 nm zu 465 nm

• Es verschwindet ganz.

An welche Aminosäuren bindet Coomassie-Brilliantblau im Bradford-Assay besonders?

• Vor allem an kationische und hydrophobe Aminosäuren

• Nur an saure Aminosäuren

• Nur an aromatische Aminosäuren

• An keine Aminosäuren, sondern nur an Zucker

Wie muss verdünnt werden, wenn die Absorption zu hoch ist?

• Gar nicht, sonst ist das Ergebnis verfälscht

• Mit Wasser nach der Farbreaktion

• Vor der Farbreaktion: die eingesetzte Probelösung muss verdünnt werden, dann erst mit dem Farbreagenz mischen

Wird wird die Proteinkonzentration in einem kolorimetrischen Assay bestimmt?

• Durch Vergleich mit einer Eichgeraden aus einem Standardprotein

• Durch Messen der Fluoreszenz

• Durch Auszählen der Farbmoleküle

Was ist ein Vorteil des Bradford-Assays?

• Kann für jede Proteinkonzentrationsbereich genutzt werden

• sensitiver als Lowry- oder BCA-Assay

• Ergebnisse sind unabhängig von Aminosäurezusammensetzung

Welcher Nachteil ist typisch für den Bradford-Assay?

• Er ist unempfindlicher als der Lowry-Assay

• Er benötigt sehr lange Inkubationszeiten

• Unterschiedliche Proteine können trotz gleicher Menge verschiedene Absorptionen zeigen

Wie nennt man die Farbreaktion, die Proteine im Alkalischen mit Cu²⁺-Ionen eingehen?

• Bradford-Reaktion

• Biuret-Reaktion

• Lowry-Reaktion

• Coomassie-Reaktion

Warum heißt die Reaktion „Biuret-Reaktion“?

• Weil Biuret selbst ein Protein ist

• Weil Biuret die gleichen CO-NH-Bindungen wie Peptidbindungen enthält

• Weil Biuret ein Kupfersalz ist

• Weil Biuret blau gefärbt ist

Bei welcher Wellenlänge wird die Extinktion des Biuret-Protein-Komplexes gemessen?

• 280 nm

• 260 nm

• 595 nm

• 540–550 nm