KUIS 9 PEMURNIAN PROTEIN REKOMBINAN

Protein rekombinan hasil overproduksi dan isolasi protein adalah crude protein, yaitu?

• Protein yang masih bercampur dengan DNA sel inang

• Protein yang masih bercampur dengan protein sel inang

• Protein yang masih bercampur dengan RNA sel inang

• Protein yang masih bercampur dengan vektor

• Protein yang memilki zat tambahan seperti eluen buffer

Metode pemurnian protein yang banyak digunakan adalah?

• Protein cleanse tools

• Isolation of crude protein

• Sentrifugasi

• Kromatografi kolom

• Vortek mixer

Perhatikan gambar dibawah ini, dan lengkapi bagian yang kosong secara berurutan

• IMAC, Tag digestion

• Tag digestion, IMAC

• Exclusion, cleaner

• Resin, IMAC

• Crude protein, IMAC

Ketika protein memiliki bagian yang secara spesifik dapat terikat pada resin di kolom maka digunakan kromatografi kolom afinitas, bagian yang dimaksud contohnya adalah

• Inti protein

• Substatctive Protein

• His-tag protein

• Vektor protein

• Ikatan gula protein

Tahapan pemurnian kromatografi kolom secara umum terbagi menjadi 3 tahap yaitu

• Pemotongan, pengikatan protein, pencucian

• Pengikatan protein, pencucian, pengeringan

• Pengikatan protein, elusi, pengeringan

• Pengikatan protein, pembersihan, pemisahan

• Pengikatan protein, pencucian, elusi

Jika protein rekombinan yang telah dimurnikan mengandung His-tag, maka bagian tersebut harus

• Dibersihkan dengan wash buffer

• Diisolasi dengan enzim tertentu

• Dipotong dengan enzim tertentu

• Dimurnikan dengan purification buffer

• Diperpanjang dengan elution buffer

Pada prosedur ini dilakukan penyiapan buffer, Larutan Buffer mana yang tidak dibutuhkan modul ini

• Native Purification Buffer (100 mL)

• Native Binding Buffer (30 mL)

• Native Wash Buffer (50 mL)

• Native Elution Buffer (15 mL)

• Native Elution Buffer (25 mL)

Diambil 13,75 mL Native Purification buffer kemudian ditambahkan 1,25 mL 3M imidazole, pH 6,0 lalu aduk merata dan berikan NAOH atau HCL hingga pH menjadi 8,0. Langkah tersebut merupakan penyiapan buffer

• Native Binding Buffer (30 mL)

• Native Wash Buffer (50 mL)

• Native Elution Buffer (15 mL)

• Native Purification Buffer (100 mL)

• Native Wash Buffer (100 mL)

Pada penyiapan kolom Ni-NTA dilakukan resuspensi Ni-NTA dalam botol dengan cara

• Inverting botol secara perlahan

• Mengocok botol secara cepat dalam waktu 30 detik

• Mengaduk botol dengan batang pengaduk sesuai arah jarum jam

• Memberikan getaran pada botol

• Diletakkan pada sonikator

Tahapan yang tidak dilakukan pada prosedur pemurnian protein rekombinan adalah

• Penyiapan buffer

• Pemurnian pada kondisi Native

• Elektroforesis gel agarosa

• Pemotongan His-TAG

• Penyiapan kolom Ni-NTA